柱色谱实验-了解原理及应用

2024-08-20 百科知识版权反馈

【摘要】：实验四柱色谱（一）实验目的1.了解柱色谱的原理及应用。（二）实验原理吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积大，经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当洗脱剂流下时，由于不同的化合物吸附能力也不同，洗脱速度也不同，于是形成了不同的色带，分别按色带收集各组分。

实验四　柱色谱

（一）实验目的

1.了解柱色谱的原理及应用。

2.初步掌握柱层析的操作方法。

（二）实验原理

吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积大，经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当待分离的混合物流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于不同的化合物吸附能力也不同，洗脱速度也不同，于是形成了不同的色带，分别按色带收集各组分。

1.常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、碳酸钙等。通常应根据实际分离需要选择吸附剂。

2.化合物的吸附能力与他们的极性成正比，化合物分子中含有极性大的基团时，吸附性也较强，氧化铝对各种化合物的吸附性按以下次序递减：

酸和碱＞醇、胺、硫醇＞酯、醛、酮＞芳香族化合物＞卤代物、醚＞烯＞饱和烃

3.常用洗脱剂的极性按如下顺序递增:

己烷和石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜1-丙醇＜乙醇＜甲醇＜水

（三）实验所用试剂及仪器

中性氧化铝，溶有1mg荧光黄和1mg碱性湖蓝BB的95%乙醇溶液，石英砂，酸式滴定管，漏斗，锥形瓶

（四）操作步骤

1.装柱：如图2-7，取少许脱脂棉轻轻放于色谱柱底部，再盖一层0.5cm厚的石英砂，关闭活塞，向柱中倒入95%乙醇10mL，打开活塞，使流速为1滴/秒，再将调成糊状的8g氧化铝与10mL乙醇的混合物倒入柱中，使氧化铝自然沉降。再在上面加0.5cm厚的石英砂。操作时一直保持一定流速，不能使液面低于石英砂上层。

2.装样：当溶剂液面刚好流至石英砂面时，立即滴加入5～8滴已配好的含有1mg荧光黄和碱性湖蓝BB的95%的乙醇溶液，用少量乙醇溶液洗净管壁上的有色物质。当此溶液流至石英砂面时，继续用95%的乙醇溶液进行洗脱。(www.chuimin.cn)

3.极性小的湖蓝BB首先被洗脱，洗脱至无色。再换一接受瓶，用3%Na₂CO₃继续洗脱极性大的荧光黄。

4.分别得到两种染料，并回收。

注意事项：

1.棉花不要塞的太紧，否则影响洗脱速度；

2.色谱柱要填装紧密，表面平整；

3.固定相要始终浸于溶液中，防止柱身干裂；

4.色谱柱的活塞不涂凡士林。

图2-7　色谱柱

1.石英砂2.谱带3.吸附剂4.玻璃棉

（五）思考与讨论

1.色谱柱中若留有空气或填装不均匀，对分离效果有何影响？如何避免？