大蒜细胞SOD的提取与分离生物化学实验

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：实验类型综合性教学时数 6一、实验目的通过大蒜细胞SOD的提取与分离，学习和掌握作方法。蛋白质和酶的提取与分离的基本原理和操作。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8磷酸缓冲液提取出。并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。

实验类型综合性

教学时数 6

一、实验目的

通过大蒜细胞SOD的提取与分离，学习和掌握作方法。蛋白质和酶的提取与分离的基本原理和操作。

二、实验原理

超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8磷酸缓冲液提取出。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。

由于超氧自由基为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD活性一般为间接方法。并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子，当加入NBT后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲月替（黄色），继而还原生成二甲月替，它是一种蓝色物质，在一定波长下有最大吸收。当加入SOD时，可以使超氧自由基与H⁺结合生成H₂O₂和O₂，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲月替生成速度减慢。通过在反应液中加入不同量的SOD酶液，光照一定时间后测定波长下各液光密度值，抑制NBT光还原相对百分率与酶活性在一定范围内呈正比，以酶液加入量为横坐标，以抑制NBT光还原相对百分率为纵坐标，在坐标纸上绘制出二者相关曲线，根据SOD抑制NBT光还原相对百分率计算酶活性。找出SOD抑制NBT光还原相对百分率为50%时的酶量作为一个酶活力单位（U）。