生产1,6-二磷酸果糖的任务

2023-06-24 理论教育版权反馈

【摘要】：图1-6-11，6-二磷酸果糖的生产工艺路线二、生产工艺过程FDP生产菌的培养将啤酒酵母接种于麦芽汁斜面培养基上，26℃培养24 h，转入种子培养基中，培养至对数生长期，转种于发酵培养基中，于28℃发酵培养24 h，静置1周，离心，收集菌体。

一、生产前准备

（一）查找资料，了解1，6-二磷酸果糖生产的基本知识

1，6-二磷酸果糖（FDP）是果糖的1，6-二磷酸酯，其分子形式有游离酸FDPH4与钠盐，如1，6-二磷酸果糖三钠（FDPNa3H）等。

FDPNa3H为白色晶形粉末，无臭，熔点为71～74℃，易溶于水，不溶于有机溶剂，4℃时较稳定，久置于空气中易吸潮结块，转为微黄色。

FDP是葡萄糖代谢过程中的重要中间产物，是分子水平上的代谢调节剂。FDP具有促进细胞内高能基团的重建，保持红细胞的韧性及向组织释放氧气的能力，是糖代谢的重要促进剂。临床验证表明，FDP是急性心肌梗死、心功能不全、冠心病、心肌缺血发作、休克等症状的急救药物，它有利于改善心力衰竭、肝肾功能衰竭等临床危象，在各类外科手术中可以作为重要辅助治疗药物，对各类肝炎引起的深度黄疸、转氨酶升高及低白蛋白血症也有较好的治疗作用。

（二）确定生产技术、生产菌种和工艺路线

（1）确定生产技术：固定化细胞法。

（2）确定生产菌种：FDP生产菌种子。

（3）确定生产工艺路线，如图1-6-1所示。

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图1-6-1　1，6-二磷酸果糖的生产工艺路线

二、生产工艺过程

（1）FDP生产菌的培养　将啤酒酵母接种于麦芽汁斜面培养基上，26℃培养24 h，转入种子培养基中，培养至对数生长期，转种于发酵培养基中，于28℃发酵培养24 h，静置1周，离心，收集菌体。

（2）固定化细胞的制备　取活化菌体用等体积生理盐水悬浮，预热至40℃，用4倍量生理盐水加热溶解卡拉胶（卡拉胶用量为32 g/L），两者于45℃混合搅拌10 min，倒入成型器皿中，4～10℃冷却30 min，加入等量0.3 mol/L KCl溶液浸泡硬化4 h，切成3 mm×3 mm×3 mm小块。

（3）活化固定化细胞　用含底物的表面活性剂于35℃浸泡活化固定化细胞12 h，用0.3 mol/L KCl溶液洗涤后浸泡于生理盐水中备用。

（4）酶促转化　使用活化固定化细胞填充柱反应器，以上行法通入30℃底物溶液（内含8%蔗糖、4%NaH2PO4、5 mmol/L ATP、30 mmol/L MgCl2），收集反应液。

（5）离子交换　反应液经除蛋白澄清过滤，清液通过已处理好的DEAE-C阴离子交换柱，经洗涤、洗脱，收集洗脱液，加入适量CaCl2使生成FDP-Ca沉淀。

（6）转酸　FDP-Ca悬浮于无菌水中，用732 H型树脂将其转成FDPH4，用2 mol/L NaOH溶液调pH为5.3～5.8，经活性炭脱色，超滤冻干，得FDPNa3H成品。

三、检验方法

FDP的含量测定采用酶分析法。用醛缩酶将FDP裂解成3-磷酸基-甘油醛和磷酸基-二羟丙酮，然后利用异构酶把磷酸基-二羟丙酮转变为3-磷酸基-甘油醛，再用磷酸甘油醛脱氢酶将3-磷酸基-甘油醛还原成磷酸基-甘油，与此同时，还原型辅酶Ⅰ（NADH）脱氢氧化成氧化型辅酶Ⅰ（NAD），根据340 nm波长处辅酶Ⅰ的吸光度变化，即可测定供试品中FDP的含量。本法的特点为快速、特异性好。

生产1,6-二磷酸果糖的任务

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