蛋白质或者肽水解而得的氨基酸种类多、含量大小差异大，再加上复杂的基质，使氨基酸的测试不能用直接的色谱方法。为了延长氨基酸的保留时间及提高测量灵敏度，就要用柱前衍生法来测试。有几种衍生剂可被用来与氨基酸反应生成衍生物。反应后产生的衍生物相对分子质量变大，极性变小，大大提高UV吸收灵敏度，这样就可以用色谱法来分离和定量测试各种不同氨基酸的衍生物。......
2023-07-02
氨基酸直接色谱法测试方法
【摘要】：氨基酸都是极性的分子，很难保留在反相色谱柱上。所以只要将移动相的p H降低到3以下，除了天冬氨酸和谷氨酸，其他氨基酸都是带正电的。
根据不同的保健需要，在一些保健品中会加入单一的或者多个游离态的氨基酸。
氨基酸都是极性的分子，很难保留在反相色谱柱上。要起到分离和定量测试的目的，就要用到离子对的方法。而用离子对的方法，待测氨基酸就必须是极性的，不是带正电就是带负电。
表5 氨基酸的等电点
从表5可以看出除了天冬氨酸和谷氨酸的等电点比较低，其他氨基酸的等电点都大于p H 5。所以只要将移动相的p H降低到3以下，除了天冬氨酸和谷氨酸，其他氨基酸都是带正电的。然后在移动相中加入阴离子就可以形成离子对，延长保留时间。常用的阴离子有己烷基磺酸盐、辛烷基磺酸盐、癸烷基磺酸盐等。
对天冬氨酸和谷氨酸的测试，可以将移动相的p H 调至6，使天冬氨酸和谷氨酸带上负电荷。然后在移动相中加入阳离子，形成离子对。常用的阳离子有四丁烷基铵等。
1.用离子对来测氨基酸的方法
（1）测试步骤
①标准液的配制：准确称取20 mg各氨基酸标准品，转入50 m L容量瓶中，加30 mL水，振荡至标准品全部溶解，再加水至刻度，摇匀后即可注射。
②样品液的配制：称取一定量含有约20 mg不同氨基酸的样品，转入50 mL容量瓶中，加入30 mL水，超声10 min，冷却后再加水至刻度，摇匀后离心5 min，吸取清液即可注射。
（2）色谱条件
色谱柱：Acquity Hss T3 C18，1.8μm，2.1×150 mm
移动相A：10 mmol／L己烷基磺酸钠，p H 2.0
移动相B：乙腈
流速：0.4 mL／min
柱温：45℃
UV检测波长：210 nm
梯度：
（3）结果计算
A标：标准品的峰面积
A样：样品的峰面积
V标：标准液的总体积（m L）
V样：样品液的总体积（m L）
W 样：样品的质量（mg）
W 标：标准品的质量（mg）
此方法不适合测试肉碱，因为肉碱与其杂质巴豆甜菜碱分不开，而巴豆甜菜碱的紫外吸收强度远远大于肉碱的紫外吸收。1%的巴豆甜菜碱的信号强度可能相当于100%的肉碱的信号强度，在测试中就算是微量的巴豆甜菜碱杂质也会引起很大的误差，所以必须要把它与肉碱完全分离开，后面的“甜菜碱、肉碱和乙酰肉碱的测试方法”介绍了分离的方法。
假如离子对方法受到干扰，可以试用离子交换法。
在低p H 条件下，大多数氨基酸带正电，所以可以用阳离子交换柱来起到分离效果。由于阳离子交换柱与带正电的氨基酸分子的静电作用力比较强，有些待测氨基酸洗脱不下来，或保留时间太长、峰型太宽。为了控制待测氨基酸与固定相之间的作用力，可在移动相中加入竞争阳离子（如NH+4等），使待测氨基酸离子被NH+4“挤出来”，参见第1章1.2节。2.用离子交换法来测氨基酸的方法
（1）测试步骤
①标准液的配制：如上。
②样品液的配制：如上。
（2）色谱条件
色谱柱：Supelcosil LCSCX，5μm，4.6×250 mm
流速：1.5 m L／min
UV检测波长：210 nm
注射量：20.0μL
移动相A：10 mmol／L磷酸钾，20 mmol／L氯化铵，p H 2.0
移动相B：乙腈
移动相A∶移动相B=25∶75
移动相中氯化铵的浓度是可以调节的，氯化铵浓度越大，待测氨基酸出来得越快；氯化铵浓度越小，待测氨基酸出来得越慢。所以通过调节氯化铵浓度，也可以帮助解决一些杂质分离上的问题。
（3）结果计算
A标：标准品的峰面积
A样：样品的峰面积
V标：标准液的总体积（m L）
V样：样品液的总体积（m L）
W 样：样品的质量（mg）
W 标：标准品的质量（mg）
- 详细阅读
-
直接转矩控制方法优化改进详细阅读
直接转矩控制估计定子磁链，由于定子磁链的估计只牵涉到定子电阻，因此对电动机参数的依赖性大大减弱了。直接转矩控制采用了转矩反馈的砰-砰控制，在加减速或负载变化的动态过程中，可以获得快速的转矩响应。图2-10给出了直接转矩控制的原理框图。直接转矩控制系统分别控制异步电动机的转速和磁链。......
2023-06-19
-
测试步骤：圆筒中试样的腐蚀测试方法详细阅读
保持圆筒垂直,使铜片不被水打湿,用经试样冲净的连接软管及其配件将装试样的容器与试验圆筒的A阀紧密连接。关闭A阀,勿使试验圆筒脱离试样容器。在试验圆筒已充满后,关闭阀A,卸开连接软管。立即把圆筒浸入40℃±0.1℃的恒温水浴中,让圆筒在水浴中放置1h。比较时应将铜片和标准腐蚀色板置于光反射约45°的方向上进行观察。......
2023-06-23
-
薯蓣皂素测试方法探析详细阅读
薯蓣皂素是人体激素的前驱物，可能对调节人体激素有帮助。薯蓣皂素存在于薯蓣属植物中，在保健品行业中薯蓣皂素多是从山药中提取而得。测试步骤①标准液的配制：准确称取10 mg薯蓣皂素标准品，转入50 mL容量瓶中，加入30 mL甲醇，振荡至标准品全部溶解，再加入甲醇至刻度，摇匀后即可注射。......
2023-07-02
-
黄芩的简易测试方法详细阅读
黄芩含有多种黄酮及黄酮苷，其中含量最多的是黄芩苷和黄芩素。反相色谱柱可以有效分离这两种化合物，并可进行定量测试。②样品液的配制：称取一定量约含有2 mg黄芩苷的样品，转入100 m L容量瓶中，加入10 mL水，振荡5 min，超声2 min，加入60 m L乙醇，再超声10 min（提取物）或40 min（原草），冷却后加入甲醇至刻度，摇匀后离心10 min，移取上层清液即可注射。......
2023-07-02
-
迷迭香的简易测试方法详细阅读
迷迭香是一种多年生香科植物，它的化学成分有迷迭香酸、鼠尾草酸、鼠尾草酚和熊果酸。测试步骤①标准液的配制：准确称取5 mg迷迭香酸、鼠尾草酸、鼠尾草酚和熊果酸标准品，转入50 m L容量瓶中，加入30 m L甲醇，超声5 min，再加入甲醇至刻度，摇匀后即可注射。......
2023-07-02
-
厚朴酚及其测试方法分析详细阅读
和厚朴酚与厚朴酚是中药厚朴的主要有效成分，具有抗菌、抑制血小板聚集等作用。测试步骤①标准液的配制：分别准确称取10 mg和厚朴酚与厚朴酚标准品，转入100 mL容量瓶中，加入60 m L甲醇，超声至标准品全部溶解，冷却后再加入甲醇至刻度，摇匀后即可注射。......
2023-07-02
-
改进直接法的方法详细阅读
直接法估计出的谱的方差特性不好，当数据长度N太大时，谱曲线起伏加剧，N太小时，谱峰的分辨率又不好，因此需要加以改进。上面3种改进方法可归纳为图6-3。图6-3 3种改进方法的框图古典谱估计，不论是间接法还是直接法，都可用FFT快速实现，且物理概念明确，因而仍是目前较常用的谱估计方法。实现上述直接法、间接法和三种改进的直接法谱分析的M......
2023-06-23
相关推荐