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主要影响单细胞培养的因素

【摘要】:在单细胞培养中,补充生长调节剂是非常重要的,它可以大大提高植板率。适当调整培养基的pH值也能提高植板率。此外,植板率高低也与细胞活力等因素有关。如在假挪威槭的悬浮细胞培养中,有合适的培养基时,把pH值小心调到6.4,其起始细胞的最低有效密度可从每毫升9×103~15×103个降低到2×103个。

1.培养基成分

除了培养基的基本成分外,采用生长过愈伤组织或悬浮细胞的液体培养基培养单细胞有时会收到良好的效果。在单细胞培养中,补充生长调节剂是非常重要的,它可以大大提高植板率。适当调整培养基的pH值也能提高植板率。

2.细胞密度

单细胞培养要求植板的细胞有一个标准的临界密度才能促进其分裂和发育,低于此临界密度,培养细胞就不能分裂和发育成细胞团。植板的密度不是一成不变的,它因培养基的营养状况而改变,即培养基的成分越复杂、营养成分越丰富,植板细胞的临界密度越低;反之,植板密度要求越高,一般要求至少每毫升103个以上。此外,植板率高低也与细胞活力等因素有关。

3.生长调节物质

在单细胞培养中,补充生长调节物质是非常重要的,它可以大大提高植板率。如在低密度中,旋花细胞培养必须加入细胞分裂素和一些氨基酸,才能开始生长和分裂。(www.chuimin.cn)

4.pH值

适当调整培养基的pH值,也能提高板植率。如在假挪威槭的悬浮细胞培养中,有合适的培养基时,把pH值小心调到6.4,其起始细胞的最低有效密度可从每毫升9×103~15×103个降低到2×103个。

5.CO2

大气中CO2浓度约为0.03%。如果人为地降低培养瓶内CO2的浓度(用氢氧化钾吸收CO2),细胞分裂就停止或不能发生;当人为地提高CO2的浓度到1%,则能促进细胞生长;进一步提高到2%,反而抑制细胞生长。