（二）多糖的生产多糖的生产包括提取、纯化、浓度的测定和纯度检查等环节。糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂结合产生颜色反应，反应后溶液呈蓝绿色，于620 nm波长处有最大吸收，吸光度与糖含量呈线性关系。......
2025-09-29
甾体激素类药物的制备方法
【摘要】：细菌、酵母、霉菌和放线菌的某些种类都可以使甾类化合物的一定部位发生有价值的转化反应。微生物转化已成为微生物工业生产的一个重要组成部分。甾体的微生物转化和一般的氨基酸、抗生素的生产不同，发酵的产物不是目的产物，而只是利用微生物的酶对甾体底物的某一部位进行特定的化学反应来获得一定的产物。
天然甾类激素，有的可进行人工合成，如雌二醇等；有的可利用微生物或其他方法对已有的化合物进行结构改造，以获得生物活性更强的新化合物，供临床使用。
细菌、酵母、霉菌和放线菌的某些种类都可以使甾类化合物的一定部位发生有价值的转化反应。微生物转化已成为微生物工业生产的一个重要组成部分。
甾体的微生物转化和一般的氨基酸、抗生素的生产不同，发酵的产物不是目的产物，而只是利用微生物的酶对甾体底物的某一部位进行特定的化学反应来获得一定的产物。整个生产过程，微生物的生长和甾体的转化完全可以分开，一般先进行菌的培养，在菌生长过程中累积甾体转化所需要的酶，然后利用这些酶来改造分子的某一部位。为了获得较多的酶，首先需保证菌体的充分生长，但微生物的生长与酶的生产条件不是完全一致的，所以这时还需了解各种菌产酶的最适条件，并尽可能地诱导生产所需要的酶而抑制不需要的酶。
（一）甾体的微生物转化生产流程
甾体的微生物转化通常分为两个阶段。第一阶段是生长阶段，它是将菌种接入斜面培养基或小米培养基培养3～5 d，然后将成熟的菌种细胞或孢子接入摇瓶或种子罐，在合适的温度、溶氧、pH等条件下培养，让其充分繁殖与生长。培养时间的长短随菌种和环境而异，细菌的生长期为12～24 h，真菌为24～72 h。第二阶段是转化阶段，一般是在微生物生长的终点，逐渐将甾体的粉末或适当的（有机）溶液加入培养物中，或把成熟细胞分离洗涤，然后悬浮于水或缓冲液中，再将底物加入。大多数甾体化合物难溶于水，所以常用的方法是先把底物溶于有机溶剂，如丙酮、乙醇、甲醇、二甲基甲酰胺（溶解度达10%～20%），浓度为2%时对微生物无毒性。微生物转化生产甾体化合物一般采用二级培养，其工艺流程如图1-11-2所示。
图1-11-2 微生物转化生产甾体化合物工艺流程
如果产物分泌在发酵液中，则将发酵滤液采用离子交换树脂吸附法吸附甾体化合物，洗脱后，减压浓缩进行结晶。(https://www.chuimin.cn)
（二）影响转化的一般因素
（1）搅拌 提高转化培养基的搅拌转速，可以增加氧气的供给并使其均匀分布而提高转化率。
（2）通气 增加氧气的供给。有研究表明，溶氧量对诱导酶产生非常重要。
（3）前体半连续地加入 可以降低一次大量加入所引起的毒性，也可减少由于发泡所引起的前体损失。
（4）培养基组成 ①氮源规格影响不太大，水解蛋白比蛋白胨好；②糖类和脂肪对11β-羟化有影响；③有些酶反应需要金属离子，例如缺锌不能进行6β-羟化，而有些金属离子使酶失活。
（三）产物的分析与分离方法
产物的分析与分离均需要用适当的与水不混溶的溶剂将甾体从培养基中提取出来，最常用的有氯仿、二氯乙烷、乙酸乙酯和甲基异丁基酮等。溶剂的用量需根据产物在培养基和溶剂中的分配系数而定，提取时要防止乳化。产物的提取液经适当的浓缩，用柱层析或直接用分步结晶的办法可以得到产物。
在发酵过程中残存基质和生成产物的分析非常重要，一般用纸层析法进行发酵液的鉴定和分离，进一步直接在纸上制备。其他分析方法（如硅胶薄板色谱、紫外吸收光谱法、高效液相色谱法等）也常使用。
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2025-09-29
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